大腸桿菌是由大腸埃希氏桿菌的某些血清型所引起豬白 染病總稱，在不同品種豬群中均有發(fā)生，對仔豬危害較大。大腸桿菌血清型多，抗原復雜，變異大，菌株易產生廣泛的耐藥陛和多重耐藥陛，因此必須采用與本場血清型—致的菌株制成多價自家滅活苗，配合使用敏感藥物才能達到最佳的防治效果?，F將規(guī)?；i場大腸桿菌病的綜合防治方法介紹如下。

1 材料和方法

1．1 材料
1．1．1 大腸桿菌采自豫北某大型豬場中典型的黃痢、白痢發(fā)病仔豬；陰性血清、陽性血清、單因子血清 (血清型分別為01、02、05、035、055、0 078、0101、 0⋯、0 、0 0 等)和大腸桿菌標準菌株 ATCC25922，均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC17853，均由河南科技學院動物科學學院預防獸醫(yī)教研室提供。

1．1．2 試驗動物2日齡仔豬，由河南科技學院動物科學學院預防獸醫(yī)教研室提供。 1．1．3 受試藥物新霉素、環(huán)丙沙星、頭孢噻呋、氟苯尼考、青霉素鉀、鏈霉素、阿莫西林、土霉素、慶大霉素、恩諾沙星、磺胺藥、乙酰甲喹、卡那霉素，均由恰威斯生物技術有限公司提供。 1．2 方法 1．2．1 病原分離培養(yǎng)及純化用無菌棉拭子自病死豬直腸采集糞樣，于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上劃線，經 37℃ 培養(yǎng)24 h后，鉤取單個、粉紅色、圓形、稍隆起、邊緣整齊、表面光滑的中等大小菌落涂片，革蘭染色、鏡檢。將檢出的兩端鈍圓、G一短小桿菌再接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，多次純化，直至無雜菌為止。然后分別移至瓊脂斜面上，作為純菌種。

1．2．2 菌種鑒定形態(tài)特征與培養(yǎng)特性：對分離菌株的形態(tài)與培養(yǎng)特性進行常規(guī)糖發(fā)酵與生化鑒定，對確定為大腸桿菌的菌株進行致病性、血清學鑒定。將生化鑒定后菌株多點皮下種于2日齡仔豬，接種菌量100億／只，并設對照，飼養(yǎng)3—7 d，觀察；選擇致病仔豬的大腸桿菌菌株為該場致病菌株。血清型鑒定：將經生理生化試驗鑒定為大腸桿菌的純培養(yǎng)菌株于普通瓊脂培養(yǎng)，用2 mL0．5％ 石碳酸生理鹽水洗下以后，以2 000 r／min離心5 rain；取其上清液，8 000 r／min離心10 min；取其沉淀物配成菌懸液，再經121 oC處理2 h，破壞K抗原，即為O抗原；4℃保存，備用。用玻板凝集和試管凝集法進行血清學鑒定，鑒定原場豬大腸桿菌致病菌株血清型。

1．2．3 滅活苗的制備、檢驗及應用試驗擴菌：用接種環(huán)分別鉤取適量優(yōu)勢血清型(O O∞、O )的菌株，劃線于營養(yǎng)瓊脂平板表面，37℃培養(yǎng)20～22 h；以滅菌生理鹽水洗下菌落作為種子，再均勻涂布于營瓊脂平板表面，37℃ 培養(yǎng)20～22 h；以滅菌生理鹽水洗下菌落，分別置于滅菌瓶中，用麥氏比濁管法測定其含菌數，使各血清型的菌液含菌數相等。滅活：分別取不同血清型的菌株培養(yǎng)液混合，以滅菌生理鹽水稀釋至含細菌總數為200 4UmL；加入甲醛使其在菌液中的最終濃度為0．4％ ，37℃滅活 48 h，其間不斷搖動；再加入等菌液體積的滅菌20％氫氧化鋁膠，最后加入柳硫汞使最終濃度為0．01％ ，混勻，檢驗，分裝。性狀和無菌檢驗：肉眼直接觀察滅活苗性狀；混勻并取適量滅活苗均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板上， 37℃ 培養(yǎng)3 d后觀察。安全性檢查：取10只小白鼠，皮下注射滅活苗， 0．1 mL／只，觀察1周內生長狀況；取10只家兔，皮下注射滅活苗，2 mL／只，觀察2 d，期間每4 h測1次體溫；取妊娠母豬10頭，產前15 d左右肌肉注射滅活苗，4 mL／頭，7 d后觀察。攻毒試驗：隨機選取免疫母豬和非免疫母豬所產2日齡仔豬各15頭，分另惆制苗細菌懸液按60億／頭進行攻毒，察仔豬哺乳期內的生長隋況，記錄仔豬發(fā)生黃痢、白痢的頭數和死亡隋況，測定其對仔豬的保護率。應用試驗：在豫北某種豬場選擇健康的妊娠母豬，隨機分為3組：第1組用本滅活苗免疫，妊娠母豬產前40天和15天分別肌肉注射，4 mL／頭；第2組用市售大腸桿菌多價滅活苗進行免疫作對照；第3組不免疫作對照。觀察試驗母豬所產仔豬在哺乳期內黃痢、白痢的發(fā)生情況和仔豬發(fā)育情況，綜合判定滅活苗的免疫效果。

1．2．4 致病性大腸桿菌藥敏試驗按常規(guī)方法進行。判斷標準：抑菌圈直徑大于15 mm為高敏，在 10—15 mm之間為中敏，在10 mm以下為耐藥。

1．2．5 敏感藥物治療試驗依據藥敏試驗選用高敏藥物，對免疫母豬所產的個別黃痢、白痢仔豬注射 5％頭孢噻呋1 mL，每天1次，連用3 d；同時注射新霉素1 mL，每天1次，連用3 d。另外，視情況給仔豬灌服補液鹽 電解多維。


2 結果

2．1 生化試驗結果生化特I生鑒定結果是分離菌為大腸桿菌菌株。經致病I生鑒定，從原場共分離到致病性大腸桿菌47株。再進行血清型鑒定，其中45株致病性大腸桿菌分屬于O蚓 (13株)、O60(10株)、O14(19株)、O 39(7株)、O 蕊(4株)、09 (2株)6個血清型，2株未定型。

2．2 滅活苗無菌檢驗結果滅活苗靜置后分層，上層為澄清液體，下層為乳白色沉淀物，振搖混勻呈均一渾濁液；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上無任何細菌生長。 #p#分頁標題#e#

2．3 安全性檢查結果被檢10只小白鼠、10只家兔在試驗期內均健活；妊娠母豬產前15天注射，7 d后未出現異常反應，胎兒、新生仔豬在哺乳期內均正常。

2．4 攻毒試驗結果攻毒后免疫組新生仔豬在哺乳期內發(fā)病2頭 (13．33％)，其中1頭死亡，死亡率和致死率分別為 6．67％ 、50．00％；攻毒后對照組新生仔豬在哺乳期內發(fā)病11頭(73．33％)，其中5頭死亡，死亡率和致死率分別為33．33％ 、45．45％ 。說明滅活苗對哺乳期內的新生仔豬具有明顯的保護作用。

2．5 應用試驗結果(見表1)從表1可以看出，滅活(原場)苗對仔豬黃、白痢有明顯的預防 果，且效果優(yōu)于對照苗，說明原場苗對地方I生仔豬黃痢、白痢發(fā)病豬也有較強的保護作用。

2．6 藥敏試驗結果 13種抗菌藥物中，致病f生大腸桿菌對頭孢噻呋、氟苯尼考、環(huán)丙沙星和新霉素高度敏感；對恩諾沙星、乙酰甲喹、磺胺藥、卡那霉素和阿莫西林中度敏感；鏈霉素、慶大霉素、青霉素鉀和土霉素低度敏感。

2．7 治療結果 39頭患黃痢、白痢的仔豬，通過上述方案治療，死亡2頭，其余的全部康復，治愈率為94．9％。


3 小結與討論
3．1 合理選擇菌種用從豬場分離出的地方致病性大腸埃希菌優(yōu)勢血清型菌株制成滅活苗，免疫當地妊娠母豬，可較好地預防仔豬黃痢、白痢的發(fā)生，提高仔豬成活率，克服了普通疫苗由于血清型差異而造成的免疫效果不佳，此方法具有推廣價值。在實際生產中，從各豬場分離出的菌株較多，而且不同豬場分離出的致病菌株通常也不相同。因此，要定期從發(fā)病豬群分離菌株，根據分離結果，一次性調整滅活苗中的優(yōu)勢菌株，且滅活苗中菌株血清型不宜太多。

3．2 選擇敏感藥物本場苗在實際應用中仔豬仍有發(fā)病，這可能與不同血清型菌株的致病力差異有關，而且不同地區(qū)豬致病性大腸桿菌菌株的耐藥性有明顯的差異。這就要求在臨床治療中進行藥敏試驗，選取敏感藥物治療才能達到較好的效果。

3．3 加強飼養(yǎng)管理加強妊娠母豬和哺乳母豬飼養(yǎng)管理，母豬舍要保持清潔、干燥，母豬飼喂全價飼料，飼料保持相對穩(wěn)定。產前5—7 d遷人產房。分娩時用水清洗乳房及外陰部，再用0．1％ 高錳酸鉀溶液消毒。棄去最初幾滴初乳后再給仔豬哺乳。仔豬要做好保溫工作，可以在產圈內設置紅外線保溫箱。做好及早開食，適時補料。一般從仔豬出生后的第7天開始，選擇適口性好、營養(yǎng)豐富、易消化的顆粒料供仔豬自由采食，充分供給清潔飲水，可促進消化器官發(fā)育，增強抵抗力，防止下痢。斷奶不要太突然，改換飼料要緩慢。適時補給鐵和硒，在仔豬出生后的第2天，一次性肌注5％ 右旋糖酐鐵2 mL或牲血素等；在缺硒地區(qū)，可在仔豬出生后的1—3 d內肌注0．1％亞硒酸鈉一維生素E 0．5—1．0 mL，斷奶時再注射1次；也可給懷孕母豬產前注射2—3 mL亞硒酸鈉一維生素E，加喂抗貧血藥，對仔豬黃痢、白痢有預防作用。

3．4 利用生態(tài)制劑生態(tài)制劑有利于豬腸道正常菌群的建立，不僅能預防仔豬黃痢、白痢，還可預防其他細菌性疾病的發(fā)生，同時還可以提高仔豬消化力，促進仔豬生長，提高斷奶重，值得規(guī)?；?font color="#800080">養(yǎng)豬場"借鑒。