回答1、LB培養(yǎng)基制備：準備10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化鈉，加入800ml去離子水，拌勻，直至完全溶解，然后用0.2ml氫氧化鈉（5mol/L）將ph調節(jié)到7.4，并加入1L去離子水，高壓蒸汽滅菌。2、倒平板：培養(yǎng)基放置在60℃水浴鍋中保溫，取出后，輕輕轉動培養(yǎng)基，讓瓊脂分布均勻。

一、甘油菌菌種活化步驟

1、LB培養(yǎng)基制備

（1）準備10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g氯化鈉，然后加入800ml去離子水，攪拌均勻，直至完全溶解，接著使用0.2ml的氫氧化鈉（5mol/L）將ph調節(jié)到7.4左右，并加入1L的去離子水，高壓蒸汽滅菌20分鐘左右。

（2）在高壓滅菌之前，應當加入15g/L（鋪制平板用）或7g/L（配制頂層瓊脂糖用）的瓊脂糖。

2、倒平板

（1）超凈臺、接種環(huán)、培養(yǎng)皿，酒精燈等用紫外線滅菌30分鐘左右。

（2）高壓滅菌后的培養(yǎng)基放置在60℃的水浴鍋中保溫，等到溶液尚未冷卻的時候，將培養(yǎng)基取出，輕輕轉動，讓瓊脂均勻分布在培養(yǎng)基溶液中。

（3）等到冷卻至50℃的時候，在超凈臺中加入抗生素，并旋轉將培養(yǎng)基混合均勻，然后從燒瓶中傾出培養(yǎng)基鋪制平板。

（4）將甘油菌凍存管放在冰上，直接用接種環(huán)在凍存管內的冰渣上蘸一下，然后涂上平板。

3、大量培養(yǎng)

（1）將冷藏的液態(tài)培養(yǎng)基重新高溫高壓滅菌，等到冷卻至50℃的時候，加入抗生素，接著將菌落挑至已經加入抗生素的液態(tài)培養(yǎng)基中（2-5ml），37℃，200rpm培養(yǎng)8小時左右。

（2）按照1：500-1000的比例，將添加了抗生素的液態(tài)LB培養(yǎng)基稀釋上一步驟所得菌液（20-25μL菌液+25ml液態(tài)LB培養(yǎng)基），37℃，200rpm培養(yǎng)12-16小時。

二、甘油菌怎么保存

1、如果是20%甘油保存菌種（甘油：菌液=20：80），一般放置在零下70℃的環(huán)境下保藏。

2、如果是一般細菌的菌種，在純化后，接種在普通肉湯管中，然后經過4-6小時增菌后，放入適量甘油-生理鹽水保存液，在零下20℃的環(huán)境下進行保藏。如果是鏈球菌屬和奈瑟氏菌屬的菌種，在純化后，接種在血清肉湯管中，在5-10%CO2中經過8-10小時增菌后，加入適量甘油-生理鹽水保存液，放置在零下80℃的環(huán)境下進行保藏。如果是真菌菌種，在純化后，直接取菌洗入肉湯，加入甘油-生理鹽水保存液，放置在零下20℃的環(huán)境下進行保藏。