回答1、獲取目的基因:目的基因可以從基因文庫中得到,也可以用聚合酶鏈式反應擴增或者化學的方法去人工合成。2、構建基因表達載體:用限制酶切斷細胞中的脫氧核糖核酸分子,將細菌中的質粒取出,用連接酶連接并重組脫氧核糖核酸分子和質粒。3、目的基因的導入:將目的基因導入到受體細胞中,包括植物細胞、動物細胞和微生物細胞。4、目的基因的檢測和鑒定:檢測目的基因是否翻譯成蛋白質,鑒定要進行抗蟲、抗病和活性鑒定。
一、轉基因抗蟲棉的培育過程
1、獲取目的基因
目的基因可以從基因文庫中得到,也可以用聚合酶鏈式反應擴增或者化學的方法去人工合成?;蛭膸炀褪前焉锏牟煌虻拿撗鹾颂呛怂崞?,并導入到受體菌中,使各個受體菌都含有該生物的不同基因。聚合酶鏈式反應擴增就是在生物體外部復制特定的脫氧核糖核酸片段,可以由此獲得目的基因。
2、構建基因表達載體
用限制酶切斷細胞中的脫氧核糖核酸分子,將細菌中的質粒取出,用連接酶連接并重組脫氧核糖核酸分子和質粒。
3、目的基因的導入
將目的基因導入到受體細胞中,常用的受體細胞中大腸桿菌、酵母菌和動植物細胞等,導入途徑類似細菌和病毒。要將目的基因導入植物細胞、動物細胞和微生物細胞,導入到植物細胞使用的是農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法,導入到動物細胞要運用顯微注射技術,導入到微生物細胞要進行鈣離子處理。
4、目的基因的檢測和鑒定
目的基因的檢測要注意檢測轉基因生物染色體的脫氧核糖核酸上是否插入了目的基因,檢測目的基因是否轉錄出了信使核糖核酸,檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。目的基因的鑒定要進行抗蟲鑒定、抗病鑒定和活性鑒定。
二、轉基因抗蟲棉的育種原理
轉基因抗蟲棉分為單價和雙價,單價抗蟲棉的育種原理是將細菌來源的、可以破壞棉鈴蟲消化道的基因改造轉入到棉花中,讓棉花細胞中可以存在這種殺蟲的消化系統(tǒng),起到抗蟲的作用。雙價抗蟲棉的育種原理是將兩種抗蟲基因同時導入到棉花中,兩種基因起到互補的作用,可以增強棉花的抗蟲性。